操作指南

▶如何提高ELISA的精准性

2022-02-24

   免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间(批内)的重复性和多次实验之间(批间)的重复性。CV值高则表明精确度低,通常由以下两个原因造成:移液技术和洗涤技术。


移液技术

        1. 移液时,枪头应对准孔中央,避免接触孔壁及底部。

        2. 移液后轻轻晃动混匀试剂。

        3. 如果您的样品具有黏性,请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。

        4. 移液不充分或移液体积不均,说明移液器需要校正。必要时请检查移液器并重新校正。

        5. 加样时,不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头,避免交叉污染。

        6. 确保使用合适的枪头。不合适的枪头无法正确量取吸液和加样的体积。

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洗涤技术

         1. 如果使用自动洗板机或多通道移液器,请确保进出口能正常运作。

         2. 最后一次洗涤后,翻转酶标板倒出多余的洗涤液,并在吸水纸上拍干液体。洗板太快或太慢都会降低精确度。不能让孔内液体自然风干,需立即进行下一步操作。

         3. 按照说明书,添加足量的洗涤液至孔内,并保证洗涤完全。

         4. 由于洗涤液不是通用的,当试剂盒内的洗涤液用完时,请不要使用其他试剂盒中的洗涤液。如有需要,可联系技术支持寻求帮助。

         5. 不要减少洗涤时的浸泡时间或跳过浸泡的步骤。

         6. 按照说明书上推荐的洗涤次数清洗,随意改变洗涤的次数会影响实验的精确性。

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贮液瓶

        为避免污染,不同的试剂使用不同的贮液瓶。一些试剂或样本很容易被污染(比如唾液、氧化剂等),请参考说明书操作。必要时候采取一些预防措施保护溶液。


封板覆膜

       使用过的封板覆膜可能含有上一步实验残留的试剂,如果重复使用会造成孔板污染,从而导致精确性低。建议每一次孵育使用新的封板覆膜。





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