操作指南

▶ELISA法手工测定的影响因素

2022-02-24

 ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,并具有操作简便、无放射性危害的优点,因而多年来广泛应用于血站和医院的实验室中,但在测定中常会出现一些误差和问题。我们通过几年的实验观察,认为影响结果的因素有如下方面。


1  试剂盒

        (1)抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活,结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高,对杂质的反应灵敏度也高,实验中空白对照OD值偏高或假阳性。

       (2)酶结合物浓度过高,也会导致OD值假性增高。


2  试验仪器

      (1)加样器是否经过校正,酶免测定血清用血量很少,如手工加样器的性能不好,吸取样品不精确,会使结果忽高忽低。

      (2)每次洗板前,应检查洗板机针孔有无堵塞。


3  操作

    (1)检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用,试剂用完及时放回冰箱冷藏,以免造成试验结果假性降低。

    (2)加样时注意勿触及包被板底部,以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性。

    (3)洗涤不充分,会使结果假性增高,过分洗涤呈假阴性。

    (4)比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽,特别是冬季板从37℃水浴箱取出时,底部留有水汽,应将板底擦干后进行比色,水汽或孔内气泡也会使OD值升高。

    (5)抗原与抗体反应达到完全平衡,依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落,温度低于4℃,影响反应速度。总之,由于ELISA实验的影响因素较多,在实际工作中必须操作规范、仔细,避免和排除各种因素的影响,使之得到准确可靠的检验结果。

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